Clonazione TA

Abbiamo sfruttato la tecnica del clonaggio TA di un gene responsabile della resistenza agli antibiotici ossia la resistenza alla kanamicina seguendo le fasi fondamentali del processo di clonazione.Contesto dell'invenzione Un requisito essenziale per un'efficace ingegneria genetica dei batteri e di altre cellule propagate in colture cellulari è la capacità di selezionare le cellule con una specifica alterazione genotipica. La strategia di selezione più comune nella tecnologia del DNA ricombinante consiste nell'includere un marcatore di selezione nel vettore di clonazione o nel plasmide. Il marcatore di selezione può essere un gene clonato o una sequenza di DNA che consente di separare le cellule ospiti contenenti il marcatore di selezione da quelle che non lo contengono. Il marcatore di selezione insieme a un mezzo di selezione adeguato mantiene il vettore di clonazione nelle cellule. Altrimenti poiché la replicazione dei plasmidi è un onere energetico per l'ospite batterico in una coltura in crescita i batteri che hanno perso il plasmide avrebbero un vantaggio di crescita rispetto alle cellule con il plasmide.