Edição do genoma com o sistema CRISPR Cas9

A engenharia do genoma está prestes a atingir a sua idade de ouro. Novas e excitantes ferramentas estão a surgir e a acumular-se no seu arsenal. Depois das TALENs e do Zing-finger está a chegar uma nova ferramenta que vale a pena acrescentar. A mais recente adição é o sistema CRISPR. Um sistema que foi descoberto pela primeira vez no Streptococcus thermophilus e cujo papel natural é a imunidade adaptativa específica da sequência contra ADN estranho em bactérias. No presente relatório o sistema CRISPR Cas9 tipo II é utilizado numa tentativa de anular o gene HPRT1 expresso em linfócitos como prova de conceito. O meio HAT em combinação com tioguanina é utilizado como meio de seleção permitindo um método de rastreio de leitura rápido e simples. Para verificar se o evento de edição foi bem sucedido nas células de mamíferos é utilizado um kit de deteção de clivagem de ADN em combinação com um ensaio enzimático.