Editing del genoma con il sistema CRISPR Cas9

L'ingegneria del genoma è agli albori della sua età dell'oro. Nuovi ed entusiasmanti strumenti si stanno aggiungendo al suo arsenale. Dopo i TALEN e gli Zing-finger un nuovo e valido strumento si sta aggiungendo. L'ultimo arrivato è il sistema CRISPR. Un sistema scoperto per la prima volta nello Streptococcus thermophilus e il cui ruolo naturale è l'immunità adattativa sequenza-specifica contro il DNA estraneo nei batteri. Nella presente relazione il sistema CRISPR Cas9 di tipo II viene utilizzato nel tentativo di eliminare il gene HPRT1 espresso nei linfociti come prova di concetto. Come mezzo di selezione è stato utilizzato il terreno HAT in combinazione con la tioguanina che consente un metodo di screening rapido e semplice. Per verificare che l'evento di editing sia avvenuto con successo nelle cellule di mammifero viene utilizzato un kit di rilevamento della scissione del DNA in combinazione con un test enzimatico.