Isolierung und Charakterisierung eines Promotors des Copalyl-Diphosphat-Synthase-Gens

Das vorgestellte Material betrifft die Klonierung des Promotors und die In-silico-Identifizierung von cis-aktiven Elementen die im Copalyl-Diphosphat-Synthase-Gen (CPS) von Salvia miltiorrhiza lokalisiert sind. Die Pflanze ist aufgrund ihrer bedeutenden biologischen Aktivität die von Terpenoidverbindungen namens Tanshinone abhängt medizinisch interessant. Da die Stoffwechselwege der Tanshinon-Biosynthese noch nicht vollständig aufgeklärt sind haben wir uns entschlossen den unbekannten Aspekt der Transkriptionsregulation von CPS dem für die Tanshinon-Biosynthese entscheidenden Enzym zu entschlüsseln. Wir haben zahlreiche cis-aktive Motive sowie homologe Transfaktoren identifiziert die möglicherweise bei der Regulation des CPS-Gens von S. miltiorrhiza aktiv sind. Die Analyse der Transfaktor-Gene die gemeinsam mit A. thaliana CPS exprimiert werden und ihr Vergleich mit den Transfaktoren die durch In-silico-Suchen des S. miltiorrhiza CPS-Promotors identifiziert wurden ergab keine gemeinsamen Proteine. Um die Ergebnisse der In-silico-Suchen experimentell zu validieren wurde der Einfluss von Auxin Gibberellin Salicylsäure und hoher Salzkonzentration auf die Promotoraktivität untersucht: Die gus-Genexpression wurde 0 12 24 48 72 und 96 Stunden nach der Hormonbehandlung oder während einer 96-stündigen Exposition gegenüber 100 mM NaCl gemessen.