Izolacja i charakterystyka promotora genu syntazy difosforanu kopalilu

Przedstawiony materiał dotyczy klonowania promotora i identyfikacji in silico elementów cis-aktywnych zlokalizowanych w genie syntazy difosforanu kopalilu (CPS) Salvia miltiorrhiza. Roślina ta jest interesująca z medycznego punktu widzenia ze względu na znaczną aktywność biologiczną zależną od związków terpenoidowych znanych jako tanshinony. Ponieważ szlaki metaboliczne biosyntezy tanshinonów nie są w pełni poznane postanowiliśmy rozszyfrować nieznany aspekt regulacji transkrypcji CPS enzymu o kluczowym znaczeniu dla biosyntezy tanshinonów. Zidentyfikowaliśmy liczne motywy cis-aktywne wraz z homologicznymi czynnikami trans-aktywnymi potencjalnie aktywnymi w regulacji genu CPS S. miltiorrhiza. Analiza genów czynników trans współekspresjonowanych z CPS A. thaliana i ich porównanie z czynnikami trans zidentyfikowanymi w badaniach in silico promotora CPS S. miltiorrhiza nie wykazała żadnych wspólnych białek. Aby eksperymentalnie zweryfikować wyniki wyszukiwań in silico oceniono wpływ auksyny gibereliny kwasu salicylowego i wysokiego stężenia soli na aktywność promotora: ekspresję genu gus mierzono 0 12 24 48 72 i 96 godzin po podaniu hormonów lub podczas 96-godzinnej ekspozycji na 100 mM NaCl.