ZASTOSOWANIE RT-PCR W CZASIE RZECZYWISTYM

Wirus pryszczycy (FMDV) jest diagnozowany za pomocą testu izolacji wirusa w połączeniu z testem ELISA antygenu a ostatnio jednoetapowym RT-PCR. Zastosowanie fluorogenicznego RT-PCR zyskuje coraz większe znaczenie w szybkim wykrywaniu FMDV z próbek klinicznych które nie mogą być przetwarzane za pomocą zwykłych testów izolacji wirusa i antygenu ELISA. Ilościowy RT-PCR w czasie rzeczywistym (qRT-PCR) łączy odwrotną transkrypcję z amplifikacją PCR i wykrywaniem pozytywnej amplifikacji przy użyciu sond fluorescencyjnych takich jak sonda TaqMan ®. W niniejszym badaniu qRT-PCR oparty na sondzie TaqMan® został ustandaryzowany i wykorzystany do wykrywania genomu FMDV z próbek klinicznych w tym wydzielin nosowych osocza i płynów ustno-gardłowych (próbki probang). Wstępną standaryzację przeprowadzono przy użyciu różnych seryjnych rozcieńczeń izolatu FMDV OTNN 24/84 (1068 TCID50) a 102 wirusy można było zidentyfikować za pomocą TaqMan® qRT-PCR. Standardy RNA zostały zsyntetyzowane in vitro z plazmidu zawierającego 110 par zasad regionu 3D izolatu FMDV typu O. Dziesięciokrotne seryjne rozcieńczenie RNA zostało wykonane i użyte jako standardowy RNA do wygenerowania krzywych wzorcowych.